アガロースゲルの作り方

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アガロースゲルの調製
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アガロースゲルは、実験作業中に修飾されるDNA断片を研究するために分子生物学実験室で働いている科学者によって作られています。アガロースゲルを作る技術は、検証および遺伝子クローニングプロジェクトのために様々なサイズのDNAを直接可視化することを可能にするので、すべての研究者によって習得されなければならない基本的な日常的技術である。すべての実験室の手順と同様に、ゲル調製は難しくありませんが、含まれる生物学的リスクのために科学的に訓練された専門家によってのみ試みられるべきです。

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アガロースゲルの作り方 （Comstock Images / Comstock /ゲッティイメージズ）

アガロースゲルの調製

ゲル基材に熱いアガロースが漏れる原因となる亀裂や何かがないことを確認してください。トレイを70％アルコールで清掃し、完全に乾かします。基部は２つの開放端と２つの閉鎖端を有する。いくつかのフォーマットでは、端部を閉じるためにクリップがそれらと共に提供されるが、大部分は開口部の間にテープストリップを置くことによってシールされなければならない。テープがホルダーから外れ、熱いアガロースが漏れるのを防ぐため、テープをしっかりとしっかりと押します。
分離し、アガロースゲル上で分析するDNA断片のサイズに基づいて、必要となる適切な割合を決定します。例えば、１％（ｗ／ｖ）では、アガロースゲルは０．５から１０ｋｂのＤＮＡセグメントの分析に有効であろう。パーセンテージが高いほど（アガロースが多いほど）、分離できるフラグメントは小さくなります。通常の実験は０．５％から２％の範囲のアガロースを利用する。 1％アガロースゲルの場合は、化学ドレッシングまたは他の封じ込めシステムに1 gのアガロース粉末を量ります。ゲルの実験室準備エリアに慎重に移してください。
適切なゲル調製エリアで、100 mlの電気泳動バッファーを測定します。それは室温であるべきです。アガロース粉末を耐火フラスコに移して、測定した量の電気泳動緩衝液を注ぐ。蒸発は存在するアガロースの割合を変えることができるので、電子レンジで混合物を穏やかに加熱するが、それを沸騰させないでください。すべてのアガロースが溶解していることを確認し、完全に混ぜ合わせ、わずかに冷ましてから0.5マイクログラム/ミリリットルの臭化エチジウムを加えます。肺や粘膜組織に刺激を与える可能性があるため、蒸気を吸い込まないでください。また、臭化エチジウムを添加した後に溶液を加熱しないでください。もう一度振って混ぜ、それから溶液がまだこぼれるほど十分に熱いうちに、それを準備されたベースに分配します。大量のサンプルまたは低濃度のDNAが存在する場合は、より厚いゲルを作成することができます。しかしながら、より細かいゲルはより鮮明に撮影されるので分析がより容易である。
サンプルに配置するための溝またはウェルを作成するためにゲルにくしを挿入します。室温で数時間、または冷蔵庫で数分間冷却します。後者の場合、ゲルの準備ができたら、アガロース結晶の存在を観察する必要があります。一般に、使用前に数分間、カウンタートップでゲルを室温まで温めると、それらは消える。ゲルを引き裂いたりウェルを壊さないように慎重に櫛を外します。アガロースゲルは使用する準備が整いました。すぐに使用しない場合は、乾燥したり溶けたりするのを防ぐために、セロハンで包むか、冷蔵庫のプラスチック容器に保存する必要があります。