CTAB抽出プロトコル

著者: Eric Farmer
作成日: 3 行進 2021
更新日: 1 J 2024
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CTAB-真菌組織からのクロロホルムDNA抽出-カツオラボトレーニング
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化学化合物臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、臭化パルミチルトリメチルアンモニウムおよび臭化セトリモニウムはすべてCTABによっても知られている。化学物質は、DNAシーケンシャルゲノム、特に植物のpH維持剤として使用されています。


粉砕はDNA抽出のために植物の細胞壁を破壊する (Jason Reed / Ryan McVay /デジタルビジョン/ Getty Images)

フォーミュラCTAB

さまざまなCTAB化学物質の処方の量は実験室によって異なります。しかしながら、全ての成分は、1MトリスHCl pH8.0、0.5M EDTA、5M NaClおよびH 2 O(時には2回蒸留)を含む。 CTAB成分に関して、いくつかの研究室は臭化セチルトリメチルアンモニウムおよび他の臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムを使用する。

植物組織の調製

植物組織の調製は、材料に応じて変わり得る。劣化することなく核物質へのアクセスを得るためには壁と細胞膜を壊さなければなりません。通常、製粉では、液体窒素を含む植物材料はDNAへのアクセスを可能にし、有害な細胞酵素と不活性化学物質を保ちます。

懸濁液と遠心分離

粉砕した組織をCTABブレード上に置き、流水のボウルに挿入する。それをクロロホルムと混合し、遠心分離して可溶性タンパク質と他の物質を分離する。次にDNAを水相から沈殿させ、注意深く洗浄して汚染塩を除去する。精製されたDNAはその後取り出され、TEスライドまたは滅菌蒸留水に保存されます。