コンテンツ
ＥＬＩＳＡ試験は、抗体または抗原の濃度を決定するのを助けるために特定の酵素に結合した抗体または抗原を使用する酵素結合免疫吸着検定法である。あなたがELISAを受けていて、あなたの結果を得るために特定の抗体を使うことができないならば、それは抗体と異なる検出方法の代わりに酵素に結合した抗原を使うので、競合ELISAが勧められます。
色の変化を使った検出
競合ELISAの一般的なプロトコールは、未標識の精製一次抗体を使用することです。抗体はマイクロタイタープレートのウェルを覆い、未知の標準物質と共にインキュベートされる。次に免疫原を添加して一次抗体と結合させ、これはまだ占有されていない抗体部位に結合する。次いで、基質を用いて色変化を生じさせて結合濃度を測定する。
ELISAリーダーを使って測定する
マイクロタイターポリスチレンプレートを使用し、各ウェルに一次抗体を添加します。最大の結合を達成するために、1マイクログラムの抗体でウェルを満たしてください。プレートを室温で4時間インキュベートする。一次捕捉抗体を添加し、ウェルをＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄する。プレートをブロッキングバッファーと共に室温で2時間インキュベートする。 PBSでウェルをもう2回洗浄し、標準液を加えます。抗原コンジュゲート溶液をウェルに入れ、再度2時間インキュベートします。プレートをＰＢＳで４回再度洗浄する。基質を添加し、ＥＬＩＳＡリーダーを用いて特定の波長で密度を測定する。
直接競合ELISA（チトクロームc）
直接競合ELISAの場合は、実験に使用している抗原の血清希釈分析を実施する必要があります。次いで、マイクロタイタープレートをシトクロムｃでコーティングし、そして一晩インキュベートする。次いで、アッセイのＥＬＩＳＡ部分をブロッキング試薬および二次抗体の添加によって実施する。吸光度の結果はマイクロプレートリーダーで読む。
チューブ内の一次抗体をインキュベートする
この手順では、一次抗体を試験管中でインキュベートし、その中で目的の抗原がそれに結合する。次にサンプルをマイクロタイタープレートのウェルに加えてインキュベートする。次にウェルを洗浄して未結合の抗原 - 抗体複合体を除去し、次にブロッキング溶液を加えて二次抗体がウェルに結合するのを防ぐ。次いで、二次抗体をプレートリーダーで読み、結果を得る。